SKIP000206
SKIP ID SKIP000206
Organism(En) -
Organism(Ja) -
Cell Type(En) -
Cell Type(Ja) -
Cell Tissue(En) -
Cell Tissue(Ja) -
Cell Origin Diseased
Cell Name 1(En) PA9
Cell Name 1(Ja) PA9
Cell Name 2(En) -
Cell Name 2(Ja) -
Disease Name 1(Ja) 家族性パーキンソン病
ICD Code 1 G20
Disease Name 1(En) familial parkinson's disease PARK2
OMIM1 600116
Disease Name 2(Ja) -
ICD Code 2 -
Disease Name 2(En) -
OMIM 2 -
Disease Name 3(Ja) -
ICD Code 3 -
Disease Name 3(En) -
OMIM 3 -
Age 71
Age Range 70-79
Sex Female
Race(En) -
Race(Ja) -
Genetic Diagnosis Yes
Not Detected No
Description(En) PARK2 iPSC, Exon 2-4 homozygous deletions in parkin
Description(Ja) PARK2 iPS細胞, parkin遺伝子 Exon 2-4 ホモ欠失
Cell Morphology human ES-like
Grade --
Vector Retrovirus
Transgene Retrovirus pMXs Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc
Adhesiveness Yes
Feeder Yes
Feeder Cell SNL 1.5x10^(6)/10cm dish, Mitomycin C treatment:400microG/ml, 2hr 15min
Medium DMEM/F12(SIGMA; D6421)
Genome Editing -
CO2 3.0
Mycoplasma -
Detection of Contaminants Mycoplasma -
Pluripotent Markers Yes
Pluripotent Markers Assay Immunocytochemical analysis
in vitro Differentiation Yes
in vitro Differentiation Assay -
in vivo Differentiation Yes
in vivo Differentiation Assay Teratoma assay
Other 1 Assay -
Other 1 Assay Method -
Other 2 Assay -
Other 2 Assay Method -
Other 3 Assay -
Other 3 Assay Method -
Karyotype -
Karyotype Assay -
Remaining Vector Detection -
Remaining Vector Detection Assay -
STR -
HLA -
Stem Cell Transcriptome analysis -
Stem Cell Transcriptome analysis Assay -
Author Name(En) Hideyuki Okano
Author Name(Ja) 岡野 栄之
Author Organization(En) Keio University
Author Organization(Ja) 慶應義塾大学
Author Contact Email -
PI Organization(En) Keio University
PI Organization(Ja) 慶應義塾大学
PI Name(En) Hideyuki Okano
PI Name(Ja) 岡野 栄之
PI Contact Email -
Availability Available
Provider Organization(En) Keio University
Provider Organization(Ja) 慶應義塾大学医学部
Provider Email akamatsu[at]a7[dot]keio[dot]jp
Provider URL -
Ethical Statement(En) -
Ethical Statement(Ja) -
Terms of Use(En) -
Terms of Use(Ja) -
PubMed ID 23039195
DOI 10.1186/1756-6606-5-35
Title Mitochondrial dysfunction associated with increased oxidative stress and α-synuclein accumulation in PARK2 iPSC-derived neurons and postmortem brain tissue.
Authors Imaizumi Y, Okada Y, Akamatsu W, Koike M, Kuzumaki N, Hayakawa H, Nihira T, Kobayashi T, Ohyama M, Sato S, Takanashi M, Funayama M, Hirayama A, Soga T, Hishiki T, Suematsu M, Yagi T, Ito D, Kosakai A, Hayashi K, Shouji M, Nakanishi A, Suzuki N, Mizuno Y, Mizushima N, Amagai M, Uchiyama Y, Mochizuki H, Hattori N, Okano H
Journal Mol Brain
Year 2012
Volume 5
Issue -
Pages 35
URL http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=23039195
Free input -
Note 確定診断方法:parkin遺伝子のexon毎に設計したprimerを用いてgenomic PCR解析を行った。
      その結果、患者由来線維芽細胞およびPA1.9.22iPSにおいてExon2,3,4のhomozygous deletionを確認。
HIV : 未実施
HTLV-1 : 未実施
HBV : 実施 陰性
HCV : 実施 陰性
病歴・治療歴等 : 67歳発症
その他の既往歴 :
家族歴 : 両親に血族結婚あり
飲酒・喫煙の嗜好歴 :
身体検査所見 :
臨床検査データ :
遺伝子組換え生物(遺伝子組換えウイルス)の産生の有無 : 産生する

維持培養方法
1.基本培地
 DMEM/F12(SIGMA; D6421)
2.血清: 使用しない
3.添加物: 使用する
 KockOutTM Serum Replecement(GIBCO; 10828-028) 20%
 Non Essential Amino Acid Solution(SIGMA; M7145) 10%
 b-mercaptoethanol(SIGMA; M7522) 0.1%
 200mM L-Glutamine(Nacalai tesque; 16948-04) 1%
 human-FGF basic(PEPRO TECH; 100-18B)4ng/mL
4.抗生物質(含抗真菌剤) : 使用する
 Penicillin/Streptomycin(Nacalai tesque; 26253-84) 0.5%
5.培養温度 : 37℃
6.CO2濃度 : 3.0%
7.培養容器 : 10 cm dish(日本ジェネティクス; FG-2090)
 コーティングの有無 : コーティングする
  Gelatin from porcine skin Type A(SIGMA; G2625)
8.Feeder Cellの使用: 使用する
 細胞名 : SNL細胞
 使用時の細胞密度 : 1.5 x 10^(6)/10cm dish
 使用前処理方法 : Mitomycin C処理 : 400microG/mL, 2hr 15min
9.継代方法
 [1]Aspirate medium.
 [2]Wash once with PBS.
 [3]Add Dissociation solution 1mL.
 [4]Aspirate Dissociation solution.
 [5]Incubate 7min at 37 degree.
 [6]Add 6ml Medium and collect colonies by mild pipetting.
 [7]Spin down at 160g 5min.
 [8]Aspirate supernatant and add appropriate volume of hiPS medium.
 [9]Dissociate colonies by Pipetting 5-6 times with 10ml pipette.(dissociate into small cell clamps)
 [10]Passage the cells 1:3-1:8. Culture at 37 degree, 3% CO2.

 *10mL plastic disposable pipette(greiner; 607160)
 *Dissociation solution
 2.5% Trypsin 5ml(GIBCO; 15090-046)
 1mg/mL Coll IV 5ml(GIBCO; 17104-019)
 1M CaCl2 0.05ml(Nacalai tesque; 06729-55)
 KSR 10ml(GIBCO; 10828-028)
 Total 50ml
 Aliquot and store at -20 degree
10.パッセージの際の細胞播種時の細胞密度
 Confluentの10cm dish 1枚から、10cm dish 3〜8枚にパッセージ
11.継代頻度 : コロニーが分化する直前 コロニーの中心および辺縁が茶色くなり始めた時点 4-6日に一回
12.その他

凍結保存方法 
・ガラス化法
 [1]Wash cells once with PBS, add and aspirate dissociation solution,
incubate 7min at 37 degree, and add 6mL of hiPS medium per 10cm dish.
 [2]Carefully detach colonies with cell scraper(keep original colony size).
 [3]Collect medium + colonies using 5mL pipette(grainer-important point).
 [4]Divide 6mL colony suspension into 2mL x 3 tupes(15mL falcons) and spin at 160 g for 5min at 4 degree.
 [5]Aspirate medium and put tubes with peletts on ice.
Freezing procedure:
 [6]Take 200 microL of freezing solution using a P1000 pipette, and reset the dial to around 300 microL.
 [7]Resuspend pellet and pipette once or twice and immediately transfer to cryotube.
 [8]Immediately transfer cryotube directly to flask containing liquid N2 for 15s abd drio the tupe into liquid N2.
 [9]Steps 8-9 must be performed within 15 seconds.

・Freezing solution(DAP213)
[1]0.59g 1M acetamide to 6mL of hiPS medium to 15ml tube
[2]Add 1.42mL 2M DMSO & 2.2mL Propylene glycol
[3]Measure up to the 10mL line by adding hiPS medium
Sterile filter through 0.2microM filters, Store at -80℃

Acetamide(SIGMA;A0500)
Dimethyl Sulfoxide(SIGMA;D5879)
Propylene glycol(SIGMA;398039)
0.2microM filter(Millipore;SLGV033RB) 

継代数 : CH2-1:P8, CH2-16:P8, CH2-19:P8

確認済の未分化マーカー
 Oct3/4 : qPCR法、ICC法
 Nanog : ICC法
SSEA-4 : ICC法
 Tra-1-60 : ICC法
 Tra-1-81 : ICC法

染色体解析 : 実施 CGH array解析済み。PARK2遺伝子の欠損以外、変異は見当たらなかった。
胚葉体形成実験 : 実施 胚葉体形成確認
テラトーマ形成実験 : 実施 テラトーマ形成確認
in vitro分化能解析 : 実施 神経への分化確認
マイコプラズマ汚染検査 : 実施 陰性
細胞同定検査(STR多型解析) : 未実施
クローニング :

その他の特性情報 : 樹立に用いた外来遺伝子の発現抑制を確認した。